Бацилус субтилиус что это
Сенна́я па́лочка (лат. Bacillus subtilis) —вид грамположительных спорообразующих факультативно аэробных почвенных бактерий.
Встречается повсеместно в почве, в воздушной пыли. Выделяют кипячением настоя сена, при котором споры сенной палочки выживают. Приводит к порче некоторых пищевых продуктов.
Отсутствие патогенности у штаммов Bacillus subtilis дало основание для присвоения им Управлением по контролю качества продовольственных и лекарственных средств США статуса GRAS (generally regarded as safe) — безопасных организмов
Использование в промышленности
B. subtilis является важным продуцентом протеаз, амилаз, аминокислот и некоторых полисахаридов и других соединений. Также является продуцентом полипептидных антибиотиков. Ввиду наличия антагонистических свойств против целого ряда возбудителей, в том числе фитопатогенов. Последнее свойство используется в биозащите растений.
Свойства
Молекулярно-биологические и структурно-функциональные особенности сенной палочки давно и подробно изучены. Бактерия относится к классу бацилл, семейству бацилиас, роду бацилус. Микроорганизмы, объединенные в вид бацилус субтилис, имеют ряд отличительных свойств: морфологических, тинкториальных, физиологических, культуральных, метаболических, биохимических.
Морфология. Bacillus subtilis – палочка, геном которой представлен кольцевой двуцепочечной ДНК. Штаммы бактерий отличаются сочетанием генов, кодирующих синтез антибиотиков, клеточной стенки и отвечающих за процесс споруляции и прорастания спор. Микроорганизм имеет прямую, слегка вытянутую форму с тупыми закругленными концами. Эта достаточно крупная палочка бесцветна. Овальные споры располагаются центрально. Их размер не превышает диаметр клетки. Бактерия благодаря перитрихиально расположенным жгутикам обладает подвижностью.
· Тинкториальные свойства. Клетки хорошо воспринимают обычные анилиновые красители. Микроорганизмы окрашиваются по Грамму в синий цвет — являются грамположительными. Под микроскопом бактерии имеют вид тонких нитевидных образований. В мазке бациллы располагаются по-разному — одиночно, скоплениями или длинными цепочками.
· Физиология. Бактерии распространены повсеместно. Они являются обитателями почвы, воздушной пыли и воды. Из почвы бациллы контактным путем распространяется на растения, с которыми в виде корма попадают в организм животных. Возможно и прямое обсеменение продуктов растительного или животного происхождения. Сенная палочка — представитель биоценоза кишечника здорового человека, препятствующий росту и размножению таких опасных микробов, как сальмонелла, протей, энтеробактер, стафилококк. Хищные животные, поедая растительную пищу, не только обогащают свой организм клетчаткой и витаминами, в него попадают споры сенной палочки, которые предупреждают развитие инфекционного процесса и укрепляют иммунитет. Размножение бактерий происходит путем простого бинарного деления с образованием двух дочерних клеток, между которыми сохраняется тонкая нить. Микробы также способны плодиться споровыми формациями.
· Метаболизм. Бацилла — сапрофит, питающийся мертвыми органическими веществами. Бактерии относятся к группе гетеротрофов, которые не могут продуцировать пищу самостоятельно. Источником энергии для сенной палочки являются природный и животный углеводы — крахмал и гликоген соответственно. Микробы аммонифицируют белки и синтезируют органические кислоты, микроэлементы, витамины, ферменты.
· Споруляция. Способность Bacillus subtilis к спорообразованию помогает ей выжить в критической обстановке. Эндоспоры выдерживают экстремальные температуры и сухие среды. Процесс образования спор довольно сложный. Структура клетки приобретает некоторую зернистость. Самое крупное зернышко непрерывно растет и покрывается плотной оболочкой. Это будущая спора. Негативное воздействие различных факторов приводит к разрушению наружной микробной оболочки. Бактериальная клетка погибает, а спора выходит во внешнюю среду. При оптимальных условиях она трансформируется в неподвижную активную бактерию, которая начинает работать – защищать почву и растения от болезней. Споры резистенты к нагреванию до 100°С и более. При кипячении сена, из которого выделяют Bacillus subtilis, они не погибают.
· Культуральные свойства.
· Сенная палочка растет в аэробных условиях в большом диапазоне температур — от +5 до +45°С.
· Температурный оптимум для бактерии — 20-30°С. Некоторые штаммы не нуждаются в кислороде и являются факультативными анаэробами. На плотных питательных средам образуются сухие, мелкие, морщинистые, бархатистые колонии с волнистым краем розового, серого цвета или полностью прозрачные. На поверхности жидких сред после инкубации появляется тонкая пленка с беловатым налетом, а на дно пробирки выпадает осадок. Бактерии неприхотливы и хорошо растут на простом агаре, в бульоне, на средах с растительными остатками и синтетических питательных средах для гетеротрофов. Для самостоятельного выделения бактерий необходимо прокипятить сено и выдержать полученный отвар в тепле двое суток. На поверхности настоя вскоре появится пленка, состоящая исключительно из бактерий.
· Биохимия. Бацилла расщепляет некоторые сахара, накапливает ацетоин — продукт анаэробного превращения глюкозы, разлагает полисахариды и белки до простых мономеров, разжижает желатин, продуцирует каталазу и лецитиназу, участвует в процессе денитрификации, дает положительную реакцию с цитратом натрия, образует аммиак и сероводород.
· Антибиотикорезистентность. Микроорганизмы устойчивы к антибиотикам из группы полимиксина, рифампицина, линкозамидов, пенициллина.
Сенная палочка не является патогенным микроорганизмом. Она относится к группе санитарно-гигиенических показателей загрязнения пищевых продуктов.
В природе обитает Бациллюс субтилис в почве, но встречается в воде и в пыли. Эти микроорганизмы ходят в состав микрофлоры нашего кишечника и желудочно-кишечного тракта животных.
Продуктами метаболизма сенной палочки являются аминокислоты, витамины, разные ферменты, антибиотики. Эти особенности бактерии человек давно научился использовать в своей деятельности.
Bacillus subtilis — действующее вещество лекарственных препаратов
В качестве активного вещества лекарственных препаратов используется лиофилизированная микробная масса живого антагонистически активного штамма Bacillus subtilis 534 или штамма Bacillus subtilis 3H,
Сенная палочка и препараты ее содержащие так же относятся к микробиологическим препаратам. Сенную палочку содержат такие выпускаемые ныне препараты как «Фитоспорин-М», «Бактофит», «Фитоплюс», «Ризоплюс», «Субтиллин» и так далее. Сенная палочка действует как антибиотик, она подавляет развитие возбудителей болезней растений, вызывающих корневую гниль, стафилококки, стрептококки и ряд других вредных бактерий. Препараты на основе сенной палочки это безопасные для человека и животных биопрепараты. Их внесение в почву оказывает положительный эффект на оздоровление почвы. Этот препарат можно легко приготовить самим, в жидком виде (настой прелого сена). Готовят настой из прелого, не покрытого плесенью сена, приготовленного из злаковых трав.
Питание
Бацилла субтилис относится к сапрофитам, то есть питается мертвой органикой. Эти бактерии, являясь гетеротрофами, не могут синтезировать органические вещества из неорганических соединений, а используют органику, произведенную другими. Из нее же они добывают и необходимый для энергетического обмена углерод.
Основным источником энергии служат глюкозосодержащие полисахариды как растительного (крахмал), так и животного (гликоген) происхождения. В процессе питания происходит синтез аминокислот, витаминов, различных ферментов и антибиотиков, увеличивается кислотность среды.
Взаимоотношения с другими организмами
Сенная палочка подавляет развитие патогенных и условно-болезнетворных микробов: сальмонелл, стрептококков, стафилококков и других. Типичный пример – выработанный многими поколениями хищных животных рефлекс периодического употребления в пищу определенных сортов растений. Это не только обогащает их организм витаминами, но и способствует попаданию в него спор сенной палочки, которая уничтожает патогенную флору и повышает иммунитет животных.
Некоторые микробы, например, молочнокислая лактобактерия плантарум (Lactobacillus plantarum), угнетают развитие сенной палочки. Сенная бацилла служит пищей для простейших. Так, начало одной из пищевых цепочек выглядит следующим образом: сенная бацилла – инфузория-туфелька – моллюск – рыба и т.д. вплоть до человека.
Методы «охоты» у простейших отличаются. Например, у амебы (Amoeba) постоянно образуются и исчезают выросты внутренней среды клеток (ложноножки или псевдоплодия). Ими она окружает жертву и втягивает ее внутрь клетки. А, например, инфузория-туфелька для поглощения пищи имеет клеточный рот (цитостом). На фото он виден как углубление на теле. С помощью растущих рядом с ним и объединенных в сложные структуры ресничек в рот загоняется вода вместе с содержащимися с ней бактериями. Инфузория находит скопления бактерий по химическим веществам, которые они выделяют.
Патогенность
Согласно большинству классификаций сенная палочка не считается патогенной для человека и животных. Она помогает переваривать пищу, расщепляя белки и углеводы, борется с патогенной микрофлорой кишечника и кожных покровов.
Как питается сенная палочка
Данную бактерию относят к сапрофитам, она питается погибшей органикой. Являясь гетеротрофом, сенная палочка не может синтезировать из неорганики вещества, необходимые для своего питания. Потому использует органику, которая была произведена другими организмами. Из нее она добывает необходимый для энергообмена углерод.
В питании основным источником служат полисахариды происхождения растительного (крахмал) и животного (гликоген). В процессе производятся аминокислоты, витамины, различные ферменты и антибиотики при помощи синтеза.
Сенная палочка безопасна для человека. Это подтверждается Управлением по контролю качества продовольственных и лекарственных средств США.
На данный момент Bacillus subtilis считается одной из самых изученных представителей рода бацилл.
Эффекты активных метаболитов Bacillus subtilis в пробиотическом продукте нового поколения
*Пятилетний импакт фактор РИНЦ за 2020 г.
Читайте в новом номере
На сегодняшний день род Bacillus — один из наиболее известных и тщательно изученных представителей рода бацилл. Большинство бактерий рода Bacillus (включая B. subtilis) неопасны для человека и широко распространены в окружающей среде. Отсутствие патогенности у штаммов B. subtilis и их метаболитов позволяет считать
их наиболее перспективными в качестве основы пробиотиков нового поколения. Среди важных свойств, присущих B. subtilis, следует выделить способность закисления среды, а также продуцирования антибиотиков, благодаря чему происходит уменьшение воздействия различных условно-патогенных, а также патогенных микроорганизмов. Продуцирование антибактериальных факторов и различных энзимов B. subtilis стало основой нового
метабиотического продукта — Бактистатина. Он представляет собой биологически активную добавку к пище, состоящую из трех природных компонентов, которые дополняют действие друг друга. Это средство соединило в себе свойства активных метаболитов Bacillus subtilis и энтеросорбента. В статье приводятся результаты клинических исследований с использованием Бактистатина при различных патологиях ЖКТ у взрослых и детей. Полученные данные свидетельствуют о хорошей эффективности и безопасности Бактистатина.
Ключевые слова: Bacillus subtilis, желудочно-кишечный тракт, метабиотик, энтеросорбент, Бактистатин.
Для цитирования: Плотникова Е.Ю. Эффекты активных метаболитов Bacillus subtilis в пробиотическом продукте нового поколения. РМЖ. Медицинское обозрение. 2018;26(3):39-44.
Kemerovo State Medical University
Key words: Bacillus subtilis, gastrointestinal tract, metabiotic, enterosorbent, Bactistatin.
For citation: Plotnikova E.Yu. Effects of active metabolites of Bacillus subtilis in a probiotic product of a new generation // RMJ. Medical Review. 2018. № 3. P. 39–44.
Рассмотрены эффекты активных метаболитов Bacillus subtilis в пробиотическом продукте нового поколения. Приводятся результаты клинических исследований с использованием Бактистатина при различных патологиях ЖКТ у взрослых и детей. Полученные данные свидетельствуют о хорошей эффективности и безопасности Бактистатина.
Характеристика Bacillus subtilis
Кишечный микробиоценоз
Исследования последних 10–20 лет показали, что кишечные микроорганизмы (включая пробиотические штаммы) способны разрушать и метаболизировать сложные пищевые питательные вещества и эндогенные вещества (слюна, соединения желудочно-кишечного сока, эпителиальные клетки, мертвые микробные клетки и т. д.), что приводит к образованию биоактивных веществ с низкой молекулярной массой (LMW), которые могут быть локализованы как внутри, так и вне микробных клеток и обнаружены в содержимом кишечника или пройти через барьер кишечного эпителия. Эти соединения, полученные из пробиотических (симбиотических) микробов, образуют так называемый пробиотический метаболизм. Взаимодействуя с соответствующими прокариотическими и эукариотическими клеточными мишенями, эти биологически и фармакологически активные соединения могут контролировать многие генетические, эпигенетические и физиологические функции; биохимические и поведенческие реакции, а также внутри- и межсетевой обмен информацией. Некоторые комменсальные микробы, включая пробиотики, могут выделять различные сигнальные молекулы, способные модифицировать межбактериальную сигнализацию (закалку кворума) и подавлять экспрессию генов вирулентности в патогенах или стимулировать рост полезных местных кишечных микроорганизмов.
По нашему мнению, пробиотики, имеющиеся в продаже в настоящее время, следует рассматривать как первое поколение средств, направленных на коррекцию микроэкологических нарушений. Будущее развитие традиционных пробиотиков будет включать в себя усовершенство вание этого поколения посредством производства естественных метабиотиков (изготовленных на основе текущих пробиотических штаммов) и синтетических (или полусинтетических) метабиотиков, которые будут аналогами или улучшенными копиями натуральных биоактивных веществ, полученных симбиотическими микроорганизмами [6–8].
Преимущества метабиотиков
Многокомпонентный комплекс Бактистатин ®
Опыт применения Бактистатина
Только для зарегистрированных пользователей
Бацилус субтилиус что это
Проблема нехватки полноценного белка в питании людей и животных в Российской Федерации с каждым годом приобретает особую остроту, в связи с чем возникает необходимость комплексного подхода в области проектирования и производства пищевых и кормовых продуктов.
Современные технологии производства мясных продуктов должны основываться на принципах ресурсосберегающих технологий, расширяя отечественный ассортимент вырабатываемых продуктов, за счет рационального использования сырьевых ресурсов.
Повышение эффективности использования сырья и основных материалов имеет первостепенное значение, так как эти затраты в структуре себестоимости продукции составляют более 70 % и даже незначительное сокращение их при производстве каждой единицы продукции в целом по предприятию дает значительный эффект. Поэтому значительное внимание должно уделяться повышению выхода готовой продукции из единицы сырья, уменьшению норм расхода сырья на единицу продукции, сокращению отходов и потерь.
Таким образом, в современной рыночной экономике и жесткой конкуренции, в условиях переходного периода, в котором находится Россия сегодня, довольно актуальным стал вопрос об экономии и рациональном использовании ресурсов.
Биологические методы за счет биомодификации химической структуры и трансформации пищевых свойств различного малоиспользуемого сырья, включая кератинсодержащее, позволяют привлечь для производства полноценных продуктов нетрадиционные источники, обеспечивающие физиологические нормы за счет комбинирования и взаимообогащения в питании.
Учитывая, что в настоящее время технология мясных продуктов выходит на качественно новый уровень на основе моделирования исходных свойств сырья, направленного на изготовление мясопродуктов, биологическая и пищевая ценность которых в наибольшей степени соответствует потребностям потребителя, все более широкое применение находит обработка сырья современными биотехнологическими методами.
Так, перспективным направлением при использовании мясного сырья с высоким содержанием соединительной ткани является его биомодификация.
В мировой практике для максимального привлечения маловостребованного сырья в агропищевых производствах используют методы биотехнологии, среди наиболее известных из которых является применение живых клеток микроорганизмов (Bacillus subtilis, Lactobacillus casei и др.). Тонкие биотехнологии имеют ряд существенных преимуществ, прежде всего связанных с экологическими аспектами, экономической и технологической целесообразностью. В процессе ферментации и биокатализа неусвояемые биополимерные системы трансформируются в высоко усвояемые продукты метаболизма бактериальных клеток, значительно обогащаются витаминами, а также минеральными веществами, при этом создаются условия для моделирования и оптимизации рецептур, продуктов и добавок с заданными свойствами. На этой основе возможна реализация импортзамещающих технологий в кормопроизводстве и производстве продуктов питания, обеспечивающих здоровье и защиту животных организмов. В связи с создавшейся ситуацией данное направление имеет большое значение и при содержании домашних животных, является объектами психологической сферы человека.
Бацилус субтилиус что это
Интенсивное развитие промышленности стало причиной возросшей потребности в нефти и нефтепродуктах. Используемые в настоящее время способы добычи нефти дают возможность извлекать лишь 20–60 % нефти, содержащейся в нефтематеринских породах. На сегодняшний день активно ведутся разработки новых технологий, позволяющих увеличить добычу нефти из уже эксплуатирующихся месторождений. Одним из перспективных направлений являются микробиологические методы увеличения нефтеотдачи пластов, основанные на способности микроорганизмов образовывать в процессе жизнедеятельности различные метаболиты, способствующие вытеснению нефти из вмещающих пород [1–3]. Данные методы повышения нефтеотдачи привлекают внимание малой капиталоемкостью, эффективностью и экологической безопасностью.
Биотехнологические методы повышения нефтеотдачи пластов основаны на биологических процессах, в которых используются микробные объекты. В течение процесса закачанные в пласт микроорганизмы метаболизируют углеводороды нефти и выделяют полезные продукты жизнедеятельности:
– спирты, растворители и слабые кислоты, которые приводят к уменьшению вязкости, понижению температуры текучести нефти, а также удаляют парафины и включения тяжелой нефти из пористых пород, увеличивая проницаемость последних;
– биополимеры, которые, растворяясь в воде, повышают ее плотность, облегчают извлечение нефти при использовании технологии заводнения;
– биологические поверхностно-активные вещества, которые делают поверхность нефти более скользкой, уменьшая трение о породы;
– газы, которые увеличивают давление внутри пласта и помогают продвигать нефть к стволу скважины [4].
Наиболее широкое применение в микробиологическом методе нефтеотдачи пластов получило использование биосурфактантов. Биосурфактанты – это гетеротрофная группа поверхностно-активных веществ, синтезируемых микроорганизмами [5]. Среди бактерий продуцентов биоПав бактерии рода Bacillus способны генерировать наиболее низкое межфазное натяжение между углеводородами и жидкой фазой, что необходимо для мобилизации нефти [6].
В лабораторных исследованиях микробиологического повышения нефтеотдачи пластов обычно используется насыпная модель пласта, которая является настольной шкалой оценки вытеснения нефти [7]. В настоящей работе на насыпных моделях пласта изучено влияние штамма Bacillus subtilis Ж105-11 способного к синтезу биоПав, на вытеснение нефти.
Материалы и методы исследования
Подготовка раствора с биоПАВ
В работе использовался штамм бактерий, выделенный из пластовых вод скважин месторождения Жанаталап. Для накопления биосурфактанта культуру бактерий культивировали в течение 5 суток на питательном бульоне следующего состава: пепсин – 5 г/л, NaCl – 5 г/л, мясной экстракт – 1 г/л, дрожжевой экстракт – 1,5 г/л; в качестве углеводородного питания использовали гексадекан в конечной концентрации в питательном бульоне 1 %. В качестве азотного питания добавляли соль азота в конечной концентрации в бульоне 0,5 %.
Подготовка насыпной модели пласта и постановка лабораторных опытов по вытеснению нефти
Постановку экспериментов по вытеснению нефти проводили на установке для изучения кернов УИК-2. В качестве насыпной модели использовали стальные колонки с внутренним диаметром 30 мм и длиной 60 мм. Колонки заполняли нефтеносной породой коллектора, в качестве которой использовали гидрофобный песок, отобранный из нефтяного месторождения Карабулак, с размерами частиц 0,25 мм. Загрузку песка проводили небольшими порциями, постукивая по внешней стороне колонки для равномерной загрузки песка и плотного его распределения по всей высоте колонки.
Для определения воздухопроницаемости модели пласта через колонку пропускали воздух. Далее колонки вакуумировали с помощью вакуумного насоса до –95 кПа и пропускали через них пластовую воду, с общей минерализацией 45 г/л (табл. 1).
Определение порового объема (PV) и пористости насыпных моделей проводили путем измерения объема воды, необходимого для полного обводнения насыпной модели и определением соотношения порового объема модели к общему объему колонки соответственно. Для окончательной подготовки насыпной модели производили её насыщение тяжелой нефтью, плотностью 0,86. Нефть из емкости перекачивалась под давлением с помощью компрессора в количестве 2 поровых объема. Далее через насыпную модель снова пропускали пластовую воду до полного прекращения вытекания нефти из колонки. Остаточное количество нефти, извлеченное из колонок, определяли методом волюметрии (Mor).
Бацилус субтилиус что это
Биотехнология и микробиология
1 Научно-производственная фирма «Исследовательский центр»,
наукоград Кольцово, Новосибирская обл., Россия
2 Новосибирский государственный аграрный университет, г. Новосибирск, Россия
Антагонистический потенциал сибирских штаммов
Bacillus spp. в отношении возбудителей болезней
животных и растений
Введение
Спорообразующие бактерии рода Bacillus являются продуцентами широкого спектра биологически активных веществ (БАВ), в том числе ферментов, липопептидных и других антибиотиков, спектр которых зависит от географического происхождения изолятов [1, 2]. Продукция БАВ обусловливает высокую бактерицидную и бактериостатическую активность Bacillusspp. в отношении патогенных грамположительных (Clostridiumspp.,Corynebacteriumspp., Staphylococcusaureus) и грамотрицательных (Treponemapallidum, Neisseriameningitis) бактерий [3], а также фунгицидную (фунгистатическую) активность в отношении фитопатогенных грибов – Rhizoctoniasolani, Botrytiscinerea, Aspergillusniger [4, 5]. Таким образом, представители рода Bacillus обладают бактерицидной и фунгицидной активностью, и рассматриваются как перспективные биологические агенты для создания противомикробных препаратов. Пробиотики на основе бактерий B. subtilisуспешно применяют в медицине для терапии инфекций различной этиологии [6–8]. В ветеринарной медицине препараты и кормовые добавки, включающие в качестве действующего начала бактерии рода Bacillus, используют для снижения падежа, повышения привесов, снижения конверсии кормов в свиноводстве [9, 10], птицеводстве [11], при выращивании крупного рогатого скота [12]. В защите растений от возбудителей болезней была показана эффективность штаммов B. subtilis в качестве биофунгицидов для культур открытого и защищенного грунта [13, 14], а также в технологии хранения овощей [15].
Цель работы – оценить антагонистическую активность сибирских природных штаммов бактерий рода Bacillus как потенциальную основу биопрепаратов для управления здоровьем животных и растений.
Материалы и методики исследования
Культуры микроорганизмов. Штаммы бактерий-антагонистов патогенной микрофлоры – Bacillussubtilis, Bacillusamyloliquefaciens и Bacilluslicheniformis – были выделены из почвы лесных биоценозов Новосибирской области и депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ, Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, г. Москва) и Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany). Чистые культуры фитопатогенных грибов (Bipolarissorokiniana ВКПМ В-532, BotrytiscinereaВКПМ В-1006, FusariumgraminearumВКПМ В-147, FusariumsolaniВКПМ В-163, Fusariumchlamydosporum ВКПМ В-899, FusariumoxysporumВКПМ В-349, FusariumavenaciumВКПМ В-623) были получены в ВКПМ. Остальные тест-объекты (штаммы Alternariasolani A7 АКТЛ 112, А7 НКЛ 2в, А7 АКТЛ 125 3б, BotrytiscinereaM-01, M-4-2, FusariumsolaniК 6, Phytophthora infestans, расы 3,4 и 1-11) выделены авторами из инфицированных растений, а чистые культуры патогенных бактерий (Candidaalbicans, Citrobacterfreundii, Escherichiacoli, Klebsiellapneumonia, Proteusvulgaris, Pseudomonasaeruginosae, Salmonella entericasubsp. entericaserovarcholeraesuis, Salmonella entericasubsp. entericaserovarenteritidis, Salmonella entericasubsp. entericaserovarparatyphi B, Salmonella entericasubsp. entericaserovartyphimurium, Shigellasonnei, ShigellaflexneriIIa, Staphylococcusaureus) – из патологического органного материала, полученного от павших сельскохозяйственных животных (молодняк крупного рогатого скота, свиньи).
Данные в таблицах представлены в виде средней арифметической с доверительными интервалами. Статистическая обработка полученных данных выполнена в программе Statsoft STATISTICA for Windows 6.0.
Результаты исследования и обсуждение
Анализ антагонистической активности в отношении патогенных бактерий.
Результаты определения антагонистической активности изученных штаммов в отношении патогенов представлены в таблице 1.
Таблица 1
Антагонистическая активность бактерий в отношении патогенов, зона угнетения роста, мм
Наименование патогенного
тест-микроорганизма
Salmonella enterica subsp. enterica serovar choleraesuis
Salmonella enterica subsp. enterica serovar enteritidis
Salmonella enterica subsp. enterica serovar paratyphi B
Salmonella enterica subsp. enterica serovar typhimurium
В зависимости от ширины зоны угнетения роста микробных тест-объектов можно выделить высокую (от 11 до 30 мм), среднюю (в пределах 4–10 мм) и слабую антагонистическую активность (до 4 мм).
Наибольшее антагонистическое действие бацилл отмечено в отношении St. aureus.
Таблица 2
Ингибирующая активность бактерий в отношении фитопатогенов, %
Наименование фитопатогенного
тест-микроорганизма
A. solani A7 АКТЛ 112
A. solaniА7 АКТЛ 125 3б
B. sorokiniana ВКПМ В-532
B. cinerea ВКПМ В-1006
Fusarium graminearum ВКПМ В-147
Fusarium solani ВКПМ В-163
A. solani A7 АКТЛ 112
A. solaniА7 АКТЛ 125 3б
B. sorokiniana ВКПМ В-532
B. cinerea ВКПМ В-1006
Fusarium graminearum ВКПМ В-147
Fusarium solani ВКПМ В-163
Fusarium chlamydosporum ВКПМ В-899
Fusarium solani К 6
Fusarium oxysporum ВКПМ В-349
Fusarium avenacium ВКПМ В-623
Ph. infestans расы 3,4
Ph. infestans расы 1-11
Высокой активностью в отношении C. albicans обладали штаммы B. subtilis ВКПМ В-16041, DSM 24613 (далее по тексту Bs-1), B. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, DSM 24614 (далее по тексту Ba-1) и B. amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, DSM 24615 (далее по тексту Ba-2). Остальные штаммы бацилл проявили к данному патогену среднюю антагонистическую активность.
Все штаммы показали наличие бактерицидного действия средней и слабой степени в отношении других использованных в опыте грамотрицательных бактерий – C. freundii, E. coli, K. pneumonia, P. vulgaris, P. aeruginosa, Salmonellasp., Sh. sonnei, Sh. flexneriIIa. Зона угнетения роста составляла в среднем 2–10 мм в зависимости от вида тест-объекта.
Таким образом, все изученные штаммы бактерий B. subtilis, B. amyloliquefaciensи B. licheniformis подавляли рост патогенных бактерий, хотя и в различной степени.
Анализ антагонистической активности в отношении фитопатогенных грибов
Штаммы бактерий-антагонистов проявили ингибирующие свойства в отношении большинства использованных в опыте фитопатогенов (табл. 2).
На возбудителя альтернариоза A. solani наибольшее ингибирующее действие оказали штаммы B. amyloliquefaciens Ba-1 и Ba-2, B. licheniformis ВКПМ В-10561, DSM 24609 (далее по тексту Bl-1), иB. subtilis Bs-1. В подавлении роста возбудителя корневых гнилей B. sorokiniana высокую активность проявили штаммы B. subtilis Bs-1, B. amyloliquefaciens Ba-1и Ba-2. Эти же штаммы были максимально активными по сравнению с остальными по отношению к возбудителю серой гнили растений B. cinerea. В то же время установлено, что штаммы B. licheniformis не подавляли роста B. cinerea (штамм ВКПМ В-1006). Против фитопатогенных грибов рода Fusarium и возбудителя фитофтороза пасленовых культур Ph. infestans все изученные нами бактерии Bacillusspp. показали высокий уровень ингибирующей активности. У бактерий B. licheniformis Bl-1; ВКПМ В-10562, DSM 24610 (далее по тексту Bl-2) и ВКПМ В-10564, DSM 24612 (далее по тексту Bl-4) отсутствовала антагонистическая активность в отношении F. solani ВКПМ В-163.
Проведенные исследования показали, что помимо бактерицидного действия, которое штаммы B. subtilis, B. amyloliquefaciens и B. licheniformis оказывали на патогенные бактерии, они проявляют ингибирующую активность в отношении фитопатогенных грибов. Ряд авторов указывал на подобное антибактериальное и фунгистатическое действие спорообразующих бактерий [18–21]. Как отмечено выше, это связано с тем, что перечисленные бактерии в процессе жизнедеятельности выделяют антимикробные вещества широкого спектра действия [22, 23]. Поэтому спорообразующие бактерии применяют в качестве действующего начала как лекарственных препаратов [24, 25], так и экологически безопасных средств защиты растений от болезней [26, 27].
Нами установлено наличие антагонизма изученных штаммов бактерий рода Bacillus в опытах invitro в отношении бактерий-возбудителей болезней животных и человека – C. freundii, E. coli, K. pneumonia, P. vulgaris, P. aeruginosa, Salmonellasp., Sh. sonnei, Sh. flexneri IIa и St. aureus, C. albicans. Что касается антагонистической активности в отношении фитопатогенных грибов, то добавление изученных штаммов в питательную среду подавляло рост опасных возбудителей болезней растений A. solani, B. sorokiniana, Ph. infestans и грибов рода Fusarium в большей или меньшей степени в зависимости от штамма тест-микроорганизма. Для одного из использованных в эксперименте штаммов – B. cinerea ВКПМ В-1006 – не выявлено ингибирующего действия со стороны бактерий-антагонистов B. licheniformis. Наши результаты согласуются с данными, полученными другими авторами в работах, касающихся патогенных бактерий Corynebacteriumdiphteriae, St. aureus, Streptococcushaemolyticus, P. aeruginosa[28] и фитопатогенных грибов [29, 30]. Так, Н.И. Габриэлян с соавторами [28] показали, что штамм бактерии B. subtilis, входящий в состав препарата споробактерин, обладает высокой антагонистической активностью в отношении стафилококков (St. aureus, St. epidermidis, St. saprophyticus), дрожжеподобных грибов Candidaspp.и энтерококков (Enterococcusfaecium). В то же время, авторы отмечают, что среди изученных штаммов другого вида энтерококка – E. faecalis – лишь 50% были чувствительны к штамму-антагонисту. Авторы указывают, что изученный ими штамм B. subtilis эффективно подавлял лишь 36,8% штаммов патогенных бактерий, среди которых были E. coli, Klebsiellaspp., Serratiaspp. и другие, тогда как изученные в нашей работе штаммы бактерий-антагонистов B. subtilis, B. amyloliquefaciensи B. licheniformis в 100% случаев ингибировали перечисленных патогенов.
Продемонстрировано наличие у B. subtilis ингибирующей активности по отношению к таким фитопатогенным грибам, как A. alternata, B. cinerea, B. sorokiniana, Cladosporiumsp., F. avenacium, F. oxysporum и другим [31]. При этом отмечено, что некоторые из изученных авторами штаммов обладали 100%-й ингибирующей активностью в отношении B. cinerea и F. oxysporum, чего не наблюдалось в наших экспериментах.
Наблюдающиеся различия в оценке антагонистической активности бактериальных штаммов, представленные в разных работах, могут быть связаны с разным географическим происхождением изучаемых культур [32]. Различия в антагонистической активности против штаммов патогенов одного вида можно объяснить вариабельным составом пептидогликана бактериальной клетки, который является регулятором взаимоотношений в системе «прокариот-прокариот», а также регулятором внутриродового и межродового антагонизма в условиях межмикробных взаимодействий [33].
Заключение
Таким образом, в результате проведенных исследований был выявлен антагонистический потенциал природных сибирских штаммов бактерий рода Bacillus. Bсе изученные штаммы бактерий-антагонистов B. subtilis, B. amyloliquefaciensи B. licheniformis проявили бактерицидное и фунгистатическое действия invitro на чистых культурах патогенных бактерий и фитопатогенных грибов. Подавление штаммами-антагонистами роста патогенов, вызывающих болезни сельскохозяйственных животных и растений перспективно для создания биопрепаратов, обеспечивающих получение экологически безопасной продукции животноводства и растениеводства, что важно для решения проблем здорового питания населения.
Литература
Поступила в редакцию 01.10.2013 г.
Anastasya A. Lelyak1, Margarita V. Shternshis2
1Research Center, Ltd, scientific town Koltsovo, Novosibirsk region, Russia; 2Novosibirsk State Agrarian University, Russia
ANTAGONISTIC POTENTIAL OF SIBERIAN STRAINS OF BACILLUS SPP. TOWARD AGENTS CAUSED ANIMAL AND PLANT DISEASES
Key words:Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, antagonistic activity, pathogenic bacteria, phytopathogenic fungi.